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モンス大学(UMONS)
AdHuCellプラットフォームおよび生物科学研究所
シルヴァン・ガブリエル教授、SYMBIOSE ラボ
ベルギー・モンス大学(UMONS)のシルヴァン・ガブリエル教授は、メカノバイオロジー分野を牽引する研究者であり、細胞がどのように機械的な力を感知・応答し、その「記憶」を保持するのかを研究しています。ガブリエル教授が率いる SYMBIOSE Lab は、共同設立した AdHuCell プラットフォームと連携し、高度なバイオエンジニアリングと 3D 細胞培養技術を融合させることで、細胞の移動、組織形成、がん転移といった重要な生物学的プロセスを、物理学的観点から探究しています。
本インタビューでは、研究室に新たに導入された Nikon ECLIPSE Ji-AX 共焦点統合システム が、複雑な3D生物システムの理解にどのような新たな知見をもたらし、イメージング、メカノバイオロジー、ならびに組織工学モデルの境界領域における研究をいかに前進させているのかについて、ガブリエル教授に伺いました。
— 細胞が “力” を感知し応答する仕組みを解き明かす、最前線の研究領域に迫ります。
波状基質上に形成された湾曲上皮組織
• Madin-Darby canine 腎臓 (MDCK) 細胞
• アクチン(緑):Alexa Fluor 488 Phalloidin
• DNA(青): Hoechst 33342
画像ご協力:モンス大学、マリン・ルチアーノ博士およびシルヴァン・ガブリエル博士
ご自身のご紹介と、専門分野および研究テーマについてお聞かせ
いただけますか?
私はシルヴァン・ガブリエルと申します。ベルギーのモンス大学で教授を務めており、同大学の生物科学研究所において SYMBIOSE ラボを率いるとともに、AdHuCell プラットフォームの共同ディレクターを務めています。私たちの研究はメカノバイオロジー分野、特に機械的な力が細胞の挙動をどのように形成するかに焦点を当てています。具体的には、細胞がマトリックスの硬さ、拘束、曲率といった物理的刺激をどのように感知し、適応し、さらにはそれらを「記憶」するのかを研究しています。これらの課題に取り組むために、高度な生体材料、設計された 3D マイクロシステム、高解像度イメージング技術を組み合わせています。この統合的なアプローチにより、機械的相互作用が組織形成、がんの浸潤、再生といった重要な生物学的プロセスをどのように制御しているのかを解明することが可能となります。
— ECLIPSE Jiの操作性と自動化機能が、複雑な3D培養サンプルのイメージングにおける課題を
どのように克服したのかを探ります。
ECLIPSE Jiを使用する前は、3D 細胞培養や複雑なマトリックスのイメージングにおいて、
どのような課題がありましたか?
私たちの研究グループでは、細胞生物学における重要な課題に取り組むため、カスタムマイクロシステム、3D細胞培養、およびバイオエンジニアリングマトリックスの開発に多大な努力を注いでいます。そのため、サンプル検出から画像取得までのルーチン作業を自動化しつつ、大規模な 3D ボリューム全体で高品質な光学断層像を取得できるイメージングシステムが必要でした。Nikon ECLIPSE Ji-AX は、ユーザーの操作を最小限に抑えつつ、複雑なサンプルの高速かつ信頼性の高いイメージングを実現し、これらの課題を解決してくれました。
スマートイメージングシステム ECLIPSE Ji
エラストマー(PDMS)で作製され、ガラスに接着されたマイクロ流体回路
ECLIPSE Ji を知ったきっかけと、試してみようと思った理由を教えてください。
ニコン・ヨーロッパとの協力関係を通じて、私たちはヨーロッパでの発売後、いち早くJi-AXを体験した研究室の一つとなりました。ライデンにあるNikon Bioimaging Lab を訪問し、NSPARC 実験を行った際に初めてこのシステムに触れました。 実際に動作している様子を目の当たりにし、直感的かつ高度に自動化されたイメージングワークフローが、まさに私たちの求めていたものであることに深く感銘を受けました。 私たちは、このシステムがハイコンテンツイメージングと高度な3D研究をつなぐ架け橋となる可能性をすぐに認識しました。特に、新設されたAdHuCellプラットフォームにおけるオルガノイドおよびメカノバイオロジー研究プロジェクトにおいて、その可能性は極めて大きいと考えました。
ECLIPSE Jiを初めて使用した際に、特に印象に残った機能は何ですか?
まず挙げられるのは、スマートな自動化機能です。このシステムは、サンプルを検出し、照明やフォーカスを自動で調整することで、わずか数秒で画像取得条件を最適化できます。
操作性はきわめて直感的で、学生や研究者は機器の設定に気を取られることなく、実験そのものに集中することができます。また、その柔軟性も大きな魅力です。ユーザーは「Smart Assays」 を使用して完全自動モードで操作できるほか、より詳細な制御が必要な場合には、高度なAX共焦点画像取得モードへシームレスに切り替えることも可能です。
— 微細構造から組織レベルまでをつなぐ新しい観察アプローチが、研究の質を大きく変えました。
ヒト乳腺上皮細胞(MCF10-A)
F-アクチンはAlexa Fluor 488 Phalloidin(緑色)、
DNAはHoechst 33342(青色)、
フィブロネクチンは Alexa Fluor 594(オレンジ色)
で染色されている。
画像ご協力:モンス大学、ヨハリー・カルクラ博士および
シルヴァン・ガブリエル博士
ECLIPSE Ji は、メカノバイオロジー研究にどのような貢献や進展をもたらしましたか?
これは、3D細胞の挙動を捉え、解析方法を大きく変革しました。広視野の共焦点モードを用いることで、微小組織全体や移動する細胞集団を画像化できるだけでなく、アクチン構造や核の変形といった微細な構造も解像することが可能になりました。このマルチスケールな機能は、細胞レベルの構造と組織レベルの力学を結びつける上で不可欠であり、それが私たちの研究の中核をなしています。
右の画像:ヒト乳腺上皮細胞(MCF10-A)のスフェロイド
F-アクチンはAlexa Fluor 488 Phalloidin(緑色)、
E-カドヘリンは免疫染色(赤色)、核はHoechst 33342(青色)で染色した。
画像ご協力:モンス大学、マリーヌ・ルチアーノ博士およびシルヴァン・ガブリエル博士
あなたの研究室では、ECLIPSE Jiがどのようなアプリケーションや実験において最も大きなベネフィットをもたらしましたか?
このシステムは、我々が最近取り組んでいる乳がんスフェロイドの力学特性や、小規模な細胞クラスターが閉鎖空間内を移動する現象の研究において、特に大きな成果をもたらしています。例えば、スフェロイドのサイズ変化や機械的ストレス下での変形に伴う細胞骨格の再編成を追跡しながら、従来は取得に多大な時間を要していたハイコンテンツデータセットも生成できるようになりました。
ECLIPSE Jiのインターフェースと操作性は、特に複雑な3D細胞培養やメカノバイオロジー実験において、
どの程度使いやすいと感じましたか?
非常にユーザーフレンドリーな設計です。インターフェースが各ステップを丁寧にガイドしてくれるため、専門外のユーザーでも簡単に操作できます。特に若手研究者の育成に最適でありながら、定量的な生物物理学やメカノバイオロジー実験に求められる高い精度と再現性も兼ね備えています。
クリーンベンチ内でサンプルを調製した後、NIS-Elements Sample Navigationを用いて96ウェルプレート上でサンプルを移動させ、共焦点イメージングを行った。
ECLIPSE JiおよびSEソフトウェアに付属のアッセイを使用したことはありますか?
もし使用したことがあれば、どのような感想をお持ちですか?
はい、私たちは Ji および NIS-Elements ソフトウェアに統合されている 「Smart Assays」 を日常的に使用しています。これらのアッセイは非常に直感的で、わずか数回のクリック操作で標準化されたイメージングワークフローを実行できます。特に日常的な実験に最適であり、日々のワークフローを大幅に効率化しました。これにより、画像の取得と解析がより堅牢かつ再現性が向上し、専門知識レベルに関わらず、すべてのユーザーが活用できるようになりました。
NIS-Elements Smart Experiment
Assay結果画面
— 誰でも同じ品質のデータを得られる環境が、日常実験と研究効率を大きく進化させます。
ECLIPSE Jiの新規ユーザー向けトレーニングはいかがですか?ECLIPSE Jiのトレーニングは、一般的な電動顕微鏡のトレーニングと比べてどうですか?
従来の電動顕微鏡と比べて、Ji は新規ユーザーへのトレーニングが驚くほど簡単です。インターフェースはガイド付きで視覚的にも分かりやすく、多くの操作手順が自動化されているため、ユーザーはすぐに操作に慣れることができます。Ji の導入により、研究室の新メンバーに対する画像取得・解析技術のトレーニング方法は大きく変わり、彼らはほぼ即座に信頼性の高いデータを生成できるようになりました。
接着性マイクロパターン上のヒト乳腺上皮細胞(MCF10-A)
F-アクチンはAlexa Fluor 488 Phalloidin(緑色)で、DNAはHoechst 33342(青色)で染色。
画像ご協力:モンス大学、ヨハリー・カルクラ博士およびシルヴァン・ガブリエル博士
ヒト真皮線維芽細胞
• F-アクチンはAlexa Fluor 594 ファロイジンで染色(赤色)
• γH2AXは免疫染色(緑)
• 核はHoechst 33342で染色(青色)
画像ご協力:モンス大学、ロアクサン・オークチュリエ氏およびシルヴァン・ガブリエル博士
この顕微鏡を使い始めてから、再現性やデータの一貫性に改善が見られましたか?
自動化および事前に定義されたイメージングプロトコルにより、すべてのユーザーが一貫した条件下でデータを取得できるため、セッション間およびオペレーター間のばらつきが最小限に抑えられます。これにより、特に照明や焦点のわずかな違いが結果に影響しやすかった長期3D培養実験において、データセットの再現性と一貫性が大幅に向上しました。例えば、γH2AX染色と 「Smart Assays」 を組み合わせることで、より堅牢で信頼性の高いDNA損傷の定量が可能となりました。
— 迅速なスクリーニングから高解像度解析まで、一貫したワークフローで実現します。
ECLIPSE Jiには、これまでお使いになった他の顕微鏡と比べて、ユニークな点や革新的な点はありますか?
自動化、汎用性、そして光学性能を兼ね備えている点が特長です。同一プラットフォーム上で、日常的な画像取得から高度な共焦点画像取得までを、これほどシームレスに切り替えられるシステムはほとんどありません。私たちにとって、この顕微鏡は日常的な実験を支えるだけでなく、高度な最新の研究も可能にする存在となっています。
波状基質上に形成された湾曲上皮組織
Madin-Darby canine 腎臓 (MDCK) 細胞
左:アクチンはAlexa Fluor 488ファロイジン(緑色)で、DNAはHoechst 33342(青色)で染色
右:細胞膜は専用マーカー(赤色)で、DNAはHoechst 33342(青色)で染色
画像ご協力:モンス大学、マリン・ルチアーノ博士およびおよびシルヴァン・ガブリエル博士
ECLIPSE JiとAX共焦点顕微鏡の互換性により、3D培養や生体工学マイクロシステムの研究能力は向上しましたか?もしそうであれば、どのような点で向上しましたか?
もちろんです。Ji-AXは、AX共焦点システムおよび高倍率シリコーン浸対物レンズとシームレスに統合されます。私たちは最近、このシステムを用いて、細胞が狭い空間を移動する際に、機械的記憶の安定化にアクチン皮質がどのように寄与しているかを調査しました。現在、AX共焦点モードにおけるJiの性能を活用し、湾曲した上皮組織および健常細胞と腫瘍細胞の両方から構成される乳がんスフェロイドにおける細胞間相互作用と複雑な細胞骨格構造を研究しています。Jiによる迅速なイメージングから高解像度AX共焦点画像取得に至るこのワークフローにより、同じ生物学的プロセスを複数のスケールにわたって調査することが可能になりました。
画像ご協力:モンス大学、マリーヌ・ルチアーノ博士およびシルヴァン・ガブリエル博士
ECLIPSE Ji with AX Confocalは、以前使用していたシステムと比較して、ワークフローや結果の質をどのように向上させましたか?
このシステムによって、以前は確認できなかった詳細を捉えることができた実験の例を挙げていただけますか?
ECLIPSE Ji-AXの導入により、私たちのワークフローは大幅に加速・効率化されました。自動化機能と高性能な共焦点イメージングを組み合わせることで、優れた画質を維持したまま、サンプル処理から結果取得までのプロセスを格段に迅速化できます。例えば、乳がんスフェロイドの研究において、アクチン皮質の構造を解明し、変形時や限定された移動時の微細な細胞骨格の再編成を検出できるようになりました。これらは、従来のシステムでは捉えることが極めて困難だった詳細な情報です。これは、細胞内の機械的力と構造変化を結びつける上で、大きな進歩と言えます。
— ラボで広く活用される機器としての評価と、3D腫瘍モデル確立への展望を語ります。
ECLIPSE Jiについて、チームメンバーや協力者からどのようなフィードバックがありましたか?
フィードバックは非常に好評です。研究室のメンバー全員が、Jiの直感的で使いやすい操作性を高く評価しており、新しく配属された博士課程の学生であっても、最小限のトレーニングで論文掲載レベルの画像を作成できます。共同研究者たちも、特に2D培養、スフェロイド、オルガノイドを対象とした比較研究において、その処理速度、再現性、結果の一貫性に感銘を受けています。総じて、Ji は私たちのイメージング施設において、最も広く使用される機器の一つへと急速に成長しました。
ECLIPSE Ji を一言で表すと?
ECLIPSE Ji-AXは、インテリジェントな自動化とハイエンドなイメージング技術を融合させることで、研究室の誰もが高度な顕微鏡を活用できる環境を実現し、私たちの研究スタイルを大きく変革しました。このシステムは、優れた使いやすさと科学的な深みとの理想的なバランスを実現しています。
Nikon ECLIPSE Ji を他の研究者にも勧めたいですか?
もちろんです。3D培養、オルガノイド、あるいは単一細胞を扱う研究者にとって、機器のセットアップに何時間も費やすことなく高品質な画像を得るのに最適です。これにより時間を節約し、再現性を高めるだけでなく、研究者が技術的な複雑さに煩わされることなく、新たな発見に専念できる環境が実現します。
今後の目標や展望についてお聞かせください。
私たちの目標の一つは、3D腫瘍スフェロイドおよびオルガノイドにおける機械的記憶を予測するフレームワークを開発することです。具体的には、曲率、拘束、および機械的ストレスが細胞骨格や核をどのように動的に再編成し、それらの変化が浸潤行動にどのような影響を及ぼすのかを理解することを目指しています。ECLIPSE Ji-AXを用いた高解像度共焦点イメージングと高速落射蛍光スクリーニングを組み合わせることで、同じスフェロイド内における組織スケールの構造と、単一細胞レベルの機械的状態とを直接関連付けることが可能になります。今後数年間で、機械的刺激が乳がんの転移をどのように促進するかを解析するための定量的プラットフォームとして、3D腫瘍モデルを確立することを目指しています。
ECLIPSE Jiは、ガブリエル教授の研究を引き続き支援し、
「研究者が高度なイメージングを身近に感じられるプラットフォーム」 というニコンのビジョンを体現しています。
注:各研究者の所属機関および役職は、インタビュー当時の所属状況に基づいています。
*本動画および記事内のコメントは、専門家(個人)の見解であり、当社製品の性能・効果の保証や推奨・広告を意図するものではありません。