초해상 이미징은 회절 한계를 초월하여 해상도를 향상시킬 수 있지만, 각 기술에는 고유한 제한과 트레이드오프가 있습니다. 따라서 어떤 기술이 연구에 가장 적합한지 판단하기 위해서는 이를 충분히 이해하는 것이 필요합니다.

가장 중요한 점은 초해상 이미지의 취득 속도가 일반적으로 기존 관찰 방법보다 느리다는 것입니다. N-STORM을 이용한 이미징은 취득 속도가 비교적 느려 프레임당 1초 이상 소요되는 경우가 많아 라이브 셀 이미징에는 적합하지 않습니다. 또한 STORM 등의 SMLM 기술은 해상도를 최대한 향상시킬 수 있지만, 사용 가능한 형광 색소가 제한되어 있어 형광 색소 선택에 주의가 필요합니다.

공초점 현미경 AX/AX R에 장착 가능한 NSPARC는 고해상도와 고속 취득을 양립할 수 있습니다. 또한 사용 가능한 형광 색소 및 형광 프로브의 선택 폭이 넓어 라이브 셀 이미징에도 적합합니다.

Yokogawa CSU-W1 SoRa는 15 FPS 이상의 빠른 이미징 속도를 지원하고 특수 버퍼 시스템 없이 일반 형광 색소를 사용할 수 있어, 초해상 라이브 셀 이미징에 더욱 적합합니다.

다른 이미징 기술과 마찬가지로 초해상 이미징에서도 광학 분해능을 최대화하기 위해서는 대물렌즈의 선택이 가장 중요합니다.

대물렌즈의 개구수(NA)는 적절한 침지 매체를 사용하면서 가능한 한 높은 것을 선택해야 합니다. 니콘 초해상 시리즈 현미경 대물렌즈에는 CFI SR HP Apochromat TIRF 100XC Oil（오일 침지, NA = 1.49）, CFI SR HP Plan Apochromat Lambda S 100XC Sil（실리콘 침지, NA = 1.35）, CFI SR Plan Apochromat IR 60XC WI（수침, NA = 1.27）가 포함됩니다. 이 대물렌즈들은 각각의 침지 방식에서 최고 수준의 NA를 실현하고 있습니다.

일부 초해상 시리즈 대물렌즈에는 자동 보정 링이 탑재되어 있어, 수동 조작 없이 구면 수차 보정을 전동으로 미세 조정할 수 있습니다. 이를 통해 최고 수준의 해상도와 3D 이미징 성능을 실현합니다.

해결하려는 문제에 필요한 해상도가 기존 방법에서 크게 벗어나지 않는 경우, 초해상 방법이 요구하는 트레이드오프가 필요하지 않을 수 있습니다. 이러한 경우에는 '향상된 해상도(enhanced resolution)' 공초점 이미징의 가능성을 검토하시기 바랍니다.

향상된 해상도 공초점 이미징이란 무엇인가요? 기존 공초점 현미경은 이미 일반 광시야 현미경보다 어느 정도 해상도가 향상되어 있으며, 이론적 한계는 약 140 nm(XY)로 잘 알려져 있습니다. 그러나 이 한계에 도달하려면 무한히 작은 핀홀 조리개가 필요합니다. 실제로는 약 0.5 에어리 유닛(Airy Unit)의 핀홀 크기와 취득 후 3D 반복 디컨볼루션을 조합하여 이 한계에 근접할 수 있으며, 다양한 이미징 조건에서 약 160 nm(XY) 해상도가 현실적인 목표입니다.

니콘 AX / AX R 포인트 스캐닝 공초점 현미경은 향상된 해상도 이미징이 가능합니다. 가시광선 영역의 대부분의 형광 색소에 대해 검출을 정밀하게 조정할 수 있으며, 최대 4개의 분광 채널을 동시에 취득할 수 있다는 장점이 있습니다. 핀홀은 연속적으로 가변 가능하며 육각형 형태（정사각형이 아닌）로, 보다 정밀한 조정이 가능합니다. AX R 레조넌트 스캐닝 공초점 모델을 사용하면 향상된 해상도를 유지하면서 비디오 레이트（30 FPS）이상의 속도로 이미징할 수 있습니다.