Culture tissulaire

La culture tissulaire est le processus de maintien des cellules in vitro. Les cellules sont régulièrement maintenues en suspension, adhérant à la surface d'un récipientrécipient, ou sous forme de systèmes de culture 3D (par exemple, sphéroïdes et organoïdes). Leur utilisation en tant que systèmes modèles fait partie intégrante de la recherche en sciences de la vie et nécessite l'utilisation régulière d'un microscope optique pour évaluer la confluence (pourcentage de la surface du récipientrécipient couverte par les cellules), le comptage des cellules, la surveillance des agents pathogènes et l'évaluation morphologique.

Produits pour la culture tissulaire

Les microscopes inversés Nikon ECLIPSE Ts2 et Ts2-FL sont des systèmes primés conçus pour les travaux de routine liés à la culture tissulaire. Le Ts2-FL possède toutes les fonctionnalités du Ts2 mais fournit en outre une épifluorescence à base de DEL intégrée.

Le dispositif d'observation des cellules BioStudio-T s'adapte aux incubateurs et aux hottes à flux laminaire utilisés pour la culture tissulaire. L'imagerie en contraste de phase du récipient entier est réalisée à l'aide d'une approche unique de balayage d’objectif qui maintient le récipient immobile, permettant l'échange de récipients sans perdre les informations de position. Il est conçu pour des applications quantitatives dans la culture de tissus souches, telles que l'identification de colonies.

●: Inclus, ⚬: Optionnel

ECLIPSE Ts2
Microscope inversé		 ECLIPSE Ts2-FL
Microscope inversé		 BioStudio-T
Cell Observation Device
Intégration de la caméra Sélection libre (facultatif) Sélection libre (facultatif) Built-In CMOS Detector
Accommodates well plates, dishes, and flasks yes yes yes
Compatible with decontamination using vaporized H2O2 no no yes
Suitable for cell manufacturing facilities no no yes
Convient pour des résultats standardisés no no yes
Techniques de contraste compatiblesECLIPSE Ts2 ECLIPSE Ts2-FL BioStudio-T
Fluorescence sur champ large no yes no
Emboss Contrast de Nikon yes yes no
Contraste de phase yes yes yes
Contraste de phase apodisé yes yes yes

Discussion sur la culture tissulaire

Image en contraste de phase standard des cellules adhérentes

Image en contraste de phase apodisé du même groupe de cellules

Techniques contrastées pour la culture tissulaire

Une grande variété de types de cellules sont cultivées in vitro, y compris des cellules primaires récemment obtenues à partir de tissus, des lignées cellulaires immortalisées et des cellules souches. Ces différents types de cellules présentent des défis d'imagerie similaires.

Un obstacle à la visualisation des cellules est leur degré de transparence généralement élevé, qui limite l'utilité de la microscopie à lumière transmise sur fond clair standard. Pour cette raison, les microscopes de culture tissulaire sont souvent équipés pour l'imagerie en contraste de phase - une technique qui utilise l'interférence pour traduire les différences subtiles de longueur de trajet optique en contraste (même dans des échantillons principalement transparents). Il est important de noter que le contraste de phase est compatible avec les récipients de culture en plastique, contrairement aux techniques dépendantes de la polarisation telles que le contraste d’interférence différentielle (DIC).

Le contraste de phase rend l'identification des cellules individuelles relativement facile par rapport au fond clair, même à faible grossissement (les objectifs avec un grossissement compris entre 4 et 20X sont le plus souvent utilisés pour la culture tissulaire). Cependant, l'imagerie en contraste de phase nécessite des objectifs spécialisés et un masque annulaire correspondant dans le trajet lumineux d'éclairage. En outre, il existe différents types d'objectifs à contraste de phase parmi lesquels choisir.

La série CFI Achromat de Nikon pour objectifs à contraste de phase apodisé est utile pour l'observation de cultures tissulaires grâce à la réduction fournie de l'artefact de halo qui se produit dans les zones présentant de grandes différences de chemin optique. Cela facilite l'identification des frontières des cellules et l'observation précise de systèmes modèles plus grands, tels que des tissus et des organismes entiers, par rapport aux objectifs de contraste de phase standard.

L'accessoire optionnel Contrast Shield bloque la lumière de la pièce, offrant une méthode simple et économique pour obtenir une observation de fluorescence à rapport signal/bruit élevé dans une salle de culture très éclairée.

Imagerie en fluorescence et de culture tissulaire

L'imagerie en fluorescence devient une exigence de plus en plus courante dans le laboratoire de culture tissulaire. Par exemple, une tâche courante consiste à vérifier l'expression de fusions de protéines fluorescentes par des cellules transfectées, ce qui est important pour évaluer l'efficacité de la transfection, la bonne localisation et les niveaux d'expression. Les colorants fluorescents sont également largement utilisés pour visualiser les principaux composants subcellulaires (par exemple, les colorants Hoechst pour la coloration des noyaux dans les cellules vivantes).

L'ECLIPSE Ts2-FL comprend jusqu'à trois modules d'éclairage DEL différents sélectionnables par l'utilisateur qui sont intégrés au microscope. Le microscope se souvient automatiquement de laDEL à utiliser pour chaque position du cube de filtre et du dernier réglage de luminosité utilisé. Nikon propose également un accessoire Contrast Shield en option pour aider à bloquer la lumière ambiante d'arrière-plan, qui est souvent un problème dans les salles de culture très éclairées.

L'importance de la taille et du confort

Le travail de culture tissulaire est souvent répétitif, ce qui nécessite un système ergonomiquement correct qui donne la priorité à la facilité d'utilisation et à l'économie de mouvement. Les commandes ECLIPSE Ts2 sont regroupées en zones selon si elles sont utilisées pour l'éclairage en lumière transmise (côté gauche du microscope), l'épifluorescence (droite) ou les deux (centre).

Les microscopes de culture tissulaire sont souvent placés à l'intérieur d'enceintes de biosécurité afin de favoriser un environnement stérile et d'aider à protéger la santé des cellules. Ainsi, un microscope compact peut être avantageux pour un tel travail. De plus, la plateforme est positionnée bas sur le corps, ce qui rend l'échange répété d'échantillons plus ergonomique à effectuer en position assise par rapport aux microscopes avec des plateformes positionnées plus haut sur le corps.

The BioStudio-T est compact et peut s'adapter directement à la plupart des incubateurs de culture cellulaire de taille standard. Combiné à sa capacité à être régulièrement décontaminé à l'aide de vapeur de H2O2, le BioStudio-T peut être appliqué à l'imagerie de types de cellules sensibles, telles que les cellules souches.

Informations complémentaires sur la culture tissulaire et la microscopie

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Glossaire

Accommodates well plates, dishes, and flasks
These are the common types of vessels used for culturing cells. This category refers to the availability of Nikon stages/inserts for standard size vessels.
Compatible with decontamination using vaporized H2O2
Vaporized hydrogen peroxide decontamination is an industry standard for enclosed spaces. It is widely applied in hospitals and medical research facilities.
Contraste de phase apodisé
Le contraste de phase apodisé est une variante de la technique optimisée pour observer les zones avec des objets à forte phase, tels que les chromosomes dans une cellule mitotique. Il est également utile pour observer des tranches de tissu.
Contraste de phase
La microscopie en contraste de phase est la norme de laboratoire de longue date pour l'observation des cellules adhérentes avec une morphologie de type fibroblastique ou épithéliale. Cela inclut MDCK, HeLa, HEK et de nombreuses autres lignées cellulaires courantes.
Convient pour des résultats standardisés
Cela fait référence à la combinaison de l'imagerie et de l'analyse du récipient entier pour une quantification précise des paramètres clés d'une manière qui minimise le potentiel d'erreur dû à des facteurs tels que le jugement de l'opérateur et la taille insuffisante de l'échantillon.
Emboss Contrast de Nikon
Emboss Contrast de Nikon est une technique simple pour observer les cellules avec un relief de type 3D. Cette technique est destinée aux types de cellules épaisses, telles que les ovocytes et les cellules souches pluripotentes induites (iPSC).
Fluorescence sur champ large
La microscopie à fluorescence est nécessaire pour observer les composants cellulaires marqués avec des protéines fluorescentes ou des colorants fluorescents.
Intégration de la caméra
Nikon propose une variété d'options d'appareil photo, y compris des options CMOS monochrome et couleur rapides.
Suitable for cell manufacturing facilities
This refers to whether systems are capable of performing common types of assays applied in cell manufacturing facilities (e.g. stem cell colony identification).