Culture tissulaire

Une grande variété de types de cellules sont cultivées in vitro, y compris des cellules primaires récemment obtenues à partir de tissus, des lignées cellulaires immortalisées et des cellules souches. Ces différents types de cellules présentent des défis d'imagerie similaires.

Un obstacle à la visualisation des cellules est leur degré de transparence généralement élevé, qui limite l'utilité de la microscopie à lumière transmise sur fond clair standard. Pour cette raison, les microscopes de culture tissulaire sont souvent équipés pour l'imagerie en contraste de phase - une technique qui utilise l'interférence pour traduire les différences subtiles de longueur de trajet optique en contraste (même dans des échantillons principalement transparents). Il est important de noter que le contraste de phase est compatible avec les récipients de culture en plastique, contrairement aux techniques dépendantes de la polarisation telles que le contraste d’interférence différentielle (DIC).

Le contraste de phase rend l'identification des cellules individuelles relativement facile par rapport au fond clair, même à faible grossissement (les objectifs avec un grossissement compris entre 4 et 20X sont le plus souvent utilisés pour la culture tissulaire). Cependant, l'imagerie en contraste de phase nécessite des objectifs spécialisés et un masque annulaire correspondant dans le trajet lumineux d'éclairage. En outre, il existe différents types d'objectifs à contraste de phase parmi lesquels choisir.

La série CFI Achromat de Nikon pour objectifs à contraste de phase apodisé est utile pour l'observation de cultures tissulaires grâce à la réduction fournie de l'artefact de halo qui se produit dans les zones présentant de grandes différences de chemin optique. Cela facilite l'identification des frontières des cellules et l'observation précise de systèmes modèles plus grands, tels que des tissus et des organismes entiers, par rapport aux objectifs de contraste de phase standard.

L'imagerie en fluorescence devient une exigence de plus en plus courante dans le laboratoire de culture tissulaire. Par exemple, une tâche courante consiste à vérifier l'expression de fusions de protéines fluorescentes par des cellules transfectées, ce qui est important pour évaluer l'efficacité de la transfection, la bonne localisation et les niveaux d'expression. Les colorants fluorescents sont également largement utilisés pour visualiser les principaux composants subcellulaires (par exemple, les colorants Hoechst pour la coloration des noyaux dans les cellules vivantes).

L'ECLIPSE Ts2-FL comprend jusqu'à trois modules d'éclairage DEL différents sélectionnables par l'utilisateur qui sont intégrés au microscope. Le microscope se souvient automatiquement de laDEL à utiliser pour chaque position du cube de filtre et du dernier réglage de luminosité utilisé. Nikon propose également un accessoire Contrast Shield en option pour aider à bloquer la lumière ambiante d'arrière-plan, qui est souvent un problème dans les salles de culture très éclairées.

Le travail de culture tissulaire est souvent répétitif, ce qui nécessite un système ergonomiquement correct qui donne la priorité à la facilité d'utilisation et à l'économie de mouvement. Les commandes ECLIPSE Ts2 sont regroupées en zones selon si elles sont utilisées pour l'éclairage en lumière transmise (côté gauche du microscope), l'épifluorescence (droite) ou les deux (centre).

Les microscopes de culture tissulaire sont souvent placés à l'intérieur d'enceintes de biosécurité afin de favoriser un environnement stérile et d'aider à protéger la santé des cellules. Ainsi, un microscope compact peut être avantageux pour un tel travail. De plus, la plateforme est positionnée bas sur le corps, ce qui rend l'échange répété d'échantillons plus ergonomique à effectuer en position assise par rapport aux microscopes avec des plateformes positionnées plus haut sur le corps.