Sistema de microscopio de súper resolución

El principio de la microscopía de reconstrucción óptica estocástica

La Microscopía de Reconstrucción Óptica Estocástica (STORM) reconstruye una imagen de súper resolución combinando la información de localización de alta precisión de fluoróforos individuales en tres dimensiones y colores múltiples

N-STORM utiliza la activación estocástica de cantidades relativamente pequeñas de fluoróforos utilizando luz de muy baja intensidad. Esta "activación" estocástica aleatoria de fluoróforos permite la separación temporal de moléculas individuales, lo que permite la aproximación gaussiana de alta precisión de cada imagen del fluoróforo en XY. Al utilizar una óptica 3D-STORM especial, N-STORM también puede localizar moléculas individuales a lo largo del eje Z con alta precisión. La combinación computacional de coordenadas moleculares en tres dimensiones da como resultado imágenes 3D de súper resolución.


Detección de posición del eje Z de alta precisión

Utilizando una lente cilíndrica que condensa asimétricamente haces de luz en dirección X o Y, las ubicaciones de las moléculas del eje Z se pueden determinar con una precisión de aproximadamente 50 nm. La ubicación en Z se determina detectando la orientación del estiramiento inducido por astigmatismo en la dirección X o Y y el tamaño de las imágenes de punto desenfocado. Las imágenes fluorescentes 3D se pueden reconstruir combinando la información de ubicación del eje Z determinada con la información de ubicación del eje XY.


Variedad de marcadores foto-conmutables y métodos de marcado para una alta precisión de localización

Se encuentran disponibles varios tipos de pares activador-reportero y marcadores sin activador. El método del par de marcadores de activador-reportero proporciona una precisión de localización consistente entre los canales al aprovechar el mismo colorante indicador para diferentes canales. Cada par de marcadores consiste en un colorante activador y otro reportero, siendo el colorante activador el que regula el estado de activación del colorante reportero.

Los marcadores sin activador consisten únicamente en marcadores de formación de imágenes, lo que permite un marcado simple y técnicas de preparación de muestras tales como la inmunofluorescencia indirecta convencional utilizando anticuerpos convencionales conjugados con colorante.