Cultivo de tejidos
El cultivo de tejidos es el proceso de mantenimiento de células in vitro. Las células se mantienen habitualmente en suspensión, adheridas a la superficie de un recipiente, o como sistemas de cultivo 3D (p. ej., esferoides y organoides). Su uso como sistemas modelo es parte integral de la investigación en ciencias biológicas y requiere el uso regular de un microscopio óptico para evaluar la confluencia (porcentaje del área del recipiente cubierto por células), el recuento de células, el control de patógenos y la evaluación morfológica.
Productos para el cultivo de tejidos
Los microscopios invertidos Nikon ECLIPSE Ts2 y Ts2-FL son sistemas galardonados diseñados para el trabajo de rutina relacionado con el cultivo de tejidos. El Ts2-FL tiene todas las características del Ts2 pero, además, proporciona epifluorescencia incorporada basada en LED.
●: Incluido, ⚬: Opcional
| ECLIPSE Ts2 Microscopio invertido |
ECLIPSE Ts2-FL Microscopio invertido |
|
|---|---|---|
| Integración de cámara | Libre Selección (opcional) | Libre Selección (opcional) |
| Se adapta bien a placas, platos y matraces | yes | yes |
| Técnicas de contraste compatibles | ECLIPSE Ts2 | ECLIPSE Ts2-FL |
| Fluorescencia de campo amplio | no | yes |
| Contraste de relieve de Nikon | yes | yes |
| Contraste de fase | yes | yes |
| Contraste de fase apodizado | yes | yes |
Discusión sobre el cultivo de tejidos
Imagen de contraste de fase estándar de células adherentes
Imagen de contraste de fase apodizada del mismo grupo de células
Técnicas de contraste para el cultivo de tejidos.
Una amplia variedad de tipos de células se cultivan in vitro, incluidas las células primarias obtenidas recientemente de tejidos, las líneas celulares inmortalizadas y las células madre. Estos tipos diferentes de células presentan desafíos para la adquisición de imagen similares.
Uno de los obstáculos para ver las células es su alto grado de transparencia, lo que restringe la utilidad de la microscopía estándar de luz transmitida de campo claro. Por esta razón, los microscopios de cultivo de tejidos a menudo están equipados para capturar imágenes de contraste de fase, una técnica que utiliza la interferencia para traducir diferencias sutiles en la longitud del trayecto óptico en contraste (incluso en muestras en su mayoría transparentes). Es importante destacar que el contraste de fase es compatible con los recipientes de cultivo de plástico, a diferencia de las técnicas dependientes de la polarización, como el contraste de interferencia diferencial (DIC).
El contraste de fase hace que la identificación de células individuales sea relativamente fácil en comparación con el campo claro, incluso con un aumento bajo (las lentes objetivas con un aumento de entre 4 y 20X se usan con mayor frecuencia para el cultivo de tejidos). Sin embargo, la formación de imágenes de contraste de fase requiere lentes de objetivo especializados y una máscara anular correspondiente en la trayectoria de la luz de iluminación. Además, hay varios tipos de objetivos de contraste de fase para elegir.
La serie CFI Achromat de Nikon para lentes de objetivo de contraste de fase apodizado es útil para la observación de cultivos de tejidos gracias a la reducción provista en el artefacto de halo que surge en áreas con grandes diferencias de trayectoria óptica. Esto facilita la identificación de los bordes de las células y la observación precisa de sistemas modelo más grandes, como tejidos y organismos completos, en comparación con los objetivos de contraste de fase estándar.
El accesorio opcional Contrast Shield bloquea la luz de la sala, proporcionando un método fácil y rentable para lograr una observación de fluorescencia de alta relación señal-ruido en una sala de cultivo bien iluminada.
Imágenes de fluorescencia y cultivo de tejidos.
Las obtención de imágenes de fluorescencia se están convirtiendo cada vez más en un requisito de rutina en el laboratorio de cultivo de tejidos. Por ejemplo, una tarea común es verificar la expresión de fusiones de proteínas fluorescentes en células transfectadas, lo que es importante para evaluar la eficiencia de la transfección, la localización adecuada y los niveles de expresión. Las tinciones fluorescentes también se utilizan ampliamente para visualizar componentes subcelulares clave (p. ej., tinciones de Hoechst para teñir núcleos en células vivas).
El ECLIPSE Ts2-FL presenta hasta tres módulos de iluminación LED diferentes seleccionables por el usuario que están integrados en el microscopio. El microscopio recuerda automáticamente qué LED usar para cada posición del cubo de filtro y la última configuración de brillo utilizada. Nikon también ofrece un accesorio opcional Contrast Shield para ayudar a bloquear la luz ambiental de fondo, que suele ser un problema en salas de cultivo muy iluminadas.
La importancia del tamaño y la comodidad
El trabajo de cultivo de tejidos suele ser repetitivo, lo que genera la necesidad de un sistema ergonómicamente correcto que priorice la facilidad de uso y la economía de movimiento. Los controles ECLIPSE Ts2 se agrupan en zonas dependiendo de si se utilizan para iluminación de luz transmitida (lado izquierdo del microscopio), epifluorescencia (derecha) o ambas (centro).
Los microscopios de cultivo de tejidos a menudo se colocan dentro de gabinetes de bioseguridad para promover un ambiente estéril y ayudar a proteger la salud de las células. Por lo tanto, un microscopio compacto puede resultar ventajoso para dicho trabajo. Además, la platina se coloca en la parte baja de la base, lo que hace que el intercambio repetido de muestras sea más ergonómico para realizar desde una posición sentada en comparación con los microscopios con platinas que se colocan más arriba en la base.
Más información sobre cultivo de tejidos y microscopía
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Glosario
- Adecuado para instalaciones de fabricación de células
- Esto se refiere a si los sistemas pueden realizar tipos comunes de ensayos aplicados en instalaciones de fabricación de células (p. ej., identificación de colonias de células madre).
- Adecuado para resultados estandarizados
- Se refiere a la combinación de imágenes y análisis de recipientes completos para la cuantificación precisa de parámetros clave de una manera que minimiza la posibilidad de error debido a factores como el criterio del operador y un tamaño de muestra insuficiente.
- Compatible con la descontaminación usando H2O2 vaporizado
- Vaporized hydrogen peroxide decontamination is an industry standard for enclosed spaces. It is widely applied in hospitals and medical research facilities.
- Contraste de fase apodizado
- El contraste de fase apodizado es una variación de la técnica optimizada para observar áreas con objetos de fase potente, como los cromosomas en una célula mitótica. También es útil para observar cortes de tejido.
- Contraste de fase
- La microscopía de contraste de fase es el estándar de laboratorio desde hace mucho tiempo para la observación de células adherentes con morfología fibroblástica o epitelial. Esto incluye MDCK, HeLa, HEK y muchas otras líneas celulares comunes.
- Contraste de relieve de Nikon
- El contraste de relieve de Nikon es una técnica sencilla para observar células con un relieve similar al 3D. Esta técnica es apropiada para tipos de células gruesas, como ovocitos y células madre pluripotentes inducidas (iPSC).
- Fluorescencia de campo amplio
- La microscopía de fluorescencia es necesaria para observar los componentes celulares marcados con proteínas fluorescentes o tinciones fluorescentes.
- Integración de cámara
- Nikon ofrece una variedad de opciones de cámara, incluidas opciones de CMOS rápidas, tanto monocromáticas como de color.
- Se adapta bien a placas, platos y matraces.
- Estos son los tipos comunes de recipientes utilizados para el cultivo de células. Esta categoría se refiere a la disponibilidad de platinas/insertos Nikon para recipientes de tamaño estándar.