Cultura de Tecidos

Técnicas de contraste para cultura de tecidos

Uma grande variedade de tipos celulares é cultivada in vitro, incluindo células primárias – recentemente obtidas de tecidos –, linhagens de células imortalizadas e células-tronco. Esses diferentes tipos de células apresentam desafios de aquisição de imagem semelhantes.

Um obstáculo para observar as células é seu alto grau de transparência, que restringe a utilidade da microscopia de luz transmitida de campo claro padrão. Por esse motivo, os microscópios de cultura de tecidos são frequentemente equipados para aquisição de imagem de contraste de fase – uma técnica que usa interferência para traduzir as diferenças sutis no comprimento do caminho óptico em contraste (mesmo em espécimes transparentes). É importante ressaltar que o contraste de fase é compatível com recipientes de cultura de plástico, ao contrário de técnicas dependentes de polarização, como contraste de interferência diferencial (DIC).

O contraste de fase torna a identificação de células individuais relativamente fácil em comparação com o campo claro, mesmo em baixa magnificação (lentes objetivas com ampliação entre 4 – 20X são frequentemente mais utilizadas para cultura de tecidos). No entanto, a aquisição de imagem de contraste de fase requer lentes objetivas especializadas e uma máscara anular correspondente no caminho da luz de iluminação. Para isso, existem vários tipos de objetivas de contraste de fase disponíveis.

As lentes objetivas da Nikon da série CFI Achromat para contraste de fase apodizado são úteis para observação de cultura de tecidos graças à redução fornecida no artefato de halo que surge em áreas com grandes diferenças de caminho óptico. Isso torna mais fácil identificar as bordas das células e observar com precisão sistemas-modelo maiores, como tecidos e organismos inteiros, em comparação com as objetivas de contraste de fase padrão.

Aquisição de imagem de fluorescência e cultura de tecidos

A aquisição de imagem de fluorescência está se tornando um requisito cada vez mais rotineiro no laboratório de cultura de tecidos. Por exemplo, uma tarefa comum é verificar a expressão de proteínas fluorescentes de fusão em células transfectadas – importante para avaliar a eficiência da transfecção, localização adequada e níveis de expressão. Marcações fluorescentes também são amplamente utilizadas para visualizar os principais componentes subcelulares (por exemplo, corantes Hoechst para marcação de núcleos em células vivas).

O ECLIPSE Ts2-FL possui até três módulos diferentes de iluminação LED integrados ao microscópio, que podem ser selecionados pelo usuário. O microscópio lembra automaticamente qual LED usar para cada posição do cubo de filtro e a última configuração de brilho utilizada. A Nikon também oferece um acessório opcional, o Contrast Shield, para ajudar a bloquear a luz ambiente de fundo, o que frequentemente é um problema em salas de cultura muito iluminadas.

A importância do tamanho e do conforto

O trabalho de cultura de tecidos é muitas vezes repetitivo, resultando na necessidade de um sistema ergonomicamente correto, que priorize a facilidade de uso e economia de movimento. Os controles do ECLIPSE Ts2 são agrupados em zonas, dependendo da iluminação utilizada: luz transmitida (lado esquerdo do microscópio), epifluorescência (direito) ou ambas (centro).

Os microscópios de cultura de tecidos são frequentemente colocados dentro de cabines de biossegurança para promover um ambiente estéril e ajudar a proteger a saúde das células. Assim, um microscópio compacto pode ser vantajoso para tal trabalho. Além disso, a platina está posicionada na parte inferior do corpo do microscópio, tornando a troca repetida de amostras mais ergonômica para os usuários que se encontram sentados, em comparação com microscópios com platinas posicionadas mais acima no corpo.