Cultura de Tecidos
A cultura de tecidos é o processo de manutenção de células in vitro. As células são rotineiramente mantidas em suspensão, aderidas à superfície de um recipiente ou em sistemas de cultura 3D (por exemplo, esferoides e organoides). Seu uso como sistema-modelo é parte integrante da pesquisa em ciências da vida e requer o uso regular de um microscópio de luz para avaliação da confluência (porcentagem da área do recipiente de cultura coberta por células), contagem de células, monitoramento de patógenos e análise morfológica.
Produtos para Cultura de Tecidos
Os microscópios invertidos Nikon ECLIPSE Ts2 e Ts2-FL são sistemas premiados projetados para trabalhos rotineiros relacionados à cultura de tecidos. O Ts2-FL possui todos os recursos do Ts2, mas fornece adicionalmente epifluorescência baseada em iluminação LED integrada.
●: Incluído, ⚬: Opcional
ECLIPSE Ts2 Microscópio invertido |
ECLIPSE Ts2-FL Microscópio invertido |
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Integração de câmeras | Seleção livre (opcional) | Seleção livre (opcional) |
Acomoda placas de poços, placas de petri e frascos | yes | yes |
Técnicas de contraste compatíveis | ECLIPSE Ts2 | ECLIPSE Ts2-FL |
Fluorescência de campo amplo | no | yes |
Contraste de relevo da Nikon | yes | yes |
Contraste de fase | yes | yes |
Contraste de fase apodizado | yes | yes |
Discussão da Cultura de Tecidos
Técnicas de contraste para cultura de tecidos
Uma grande variedade de tipos celulares é cultivada in vitro, incluindo células primárias – recentemente obtidas de tecidos –, linhagens de células imortalizadas e células-tronco. Esses diferentes tipos de células apresentam desafios de aquisição de imagem semelhantes.
Um obstáculo para observar as células é seu alto grau de transparência, que restringe a utilidade da microscopia de luz transmitida de campo claro padrão. Por esse motivo, os microscópios de cultura de tecidos são frequentemente equipados para aquisição de imagem de contraste de fase – uma técnica que usa interferência para traduzir as diferenças sutis no comprimento do caminho óptico em contraste (mesmo em espécimes transparentes). É importante ressaltar que o contraste de fase é compatível com recipientes de cultura de plástico, ao contrário de técnicas dependentes de polarização, como contraste de interferência diferencial (DIC).
O contraste de fase torna a identificação de células individuais relativamente fácil em comparação com o campo claro, mesmo em baixa magnificação (lentes objetivas com ampliação entre 4 – 20X são frequentemente mais utilizadas para cultura de tecidos). No entanto, a aquisição de imagem de contraste de fase requer lentes objetivas especializadas e uma máscara anular correspondente no caminho da luz de iluminação. Para isso, existem vários tipos de objetivas de contraste de fase disponíveis.
As lentes objetivas da Nikon da série CFI Achromat para contraste de fase apodizado são úteis para observação de cultura de tecidos graças à redução fornecida no artefato de halo que surge em áreas com grandes diferenças de caminho óptico. Isso torna mais fácil identificar as bordas das células e observar com precisão sistemas-modelo maiores, como tecidos e organismos inteiros, em comparação com as objetivas de contraste de fase padrão.
Aquisição de imagem de fluorescência e cultura de tecidos
A aquisição de imagem de fluorescência está se tornando um requisito cada vez mais rotineiro no laboratório de cultura de tecidos. Por exemplo, uma tarefa comum é verificar a expressão de proteínas fluorescentes de fusão em células transfectadas – importante para avaliar a eficiência da transfecção, localização adequada e níveis de expressão. Marcações fluorescentes também são amplamente utilizadas para visualizar os principais componentes subcelulares (por exemplo, corantes Hoechst para marcação de núcleos em células vivas).
O ECLIPSE Ts2-FL possui até três módulos diferentes de iluminação LED integrados ao microscópio, que podem ser selecionados pelo usuário. O microscópio lembra automaticamente qual LED usar para cada posição do cubo de filtro e a última configuração de brilho utilizada. A Nikon também oferece um acessório opcional, o Contrast Shield, para ajudar a bloquear a luz ambiente de fundo, o que frequentemente é um problema em salas de cultura muito iluminadas.
A importância do tamanho e do conforto
O trabalho de cultura de tecidos é muitas vezes repetitivo, resultando na necessidade de um sistema ergonomicamente correto, que priorize a facilidade de uso e economia de movimento. Os controles do ECLIPSE Ts2 são agrupados em zonas, dependendo da iluminação utilizada: luz transmitida (lado esquerdo do microscópio), epifluorescência (direito) ou ambas (centro).
Os microscópios de cultura de tecidos são frequentemente colocados dentro de cabines de biossegurança para promover um ambiente estéril e ajudar a proteger a saúde das células. Assim, um microscópio compacto pode ser vantajoso para tal trabalho. Além disso, a platina está posicionada na parte inferior do corpo do microscópio, tornando a troca repetida de amostras mais ergonômica para os usuários que se encontram sentados, em comparação com microscópios com platinas posicionadas mais acima no corpo.
Informações adicionais sobre cultura de tecidos e microscopia
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Glossário
- Acomoda placas de poços, placas de petri e frascos
- Esses são os tipos comuns de recipientes utilizados na cultura de células. Essa categoria diz respeito à disponibilidade de platinas/inserções da Nikon para acomodar recipientes de cultura de tamanho padrão.
- Contraste de fase apodizado
- O contraste de fase apodizado é uma variação da técnica, otimizada para observar áreas com objetos de fase forte, como cromossomos em uma célula mitótica. Também é útil para observar cortes de tecido.
- Contraste de fase
- A microscopia de contraste de fase é o padrão laboratorial de longa data para observação de células aderentes com morfologia do tipo fibroblástica ou epitelial. Isso inclui MDCK, HeLa, HEK e muitas outras linhagens celulares comuns.
- Contraste de relevo da Nikon
- O contraste de relevo da Nikon é uma técnica simples para observar células com relevo semelhante ao 3D. Essa técnica destina-se a tipos celulares espessos, como oócitos e células-tronco pluripotentes induzidas (iPSCs).
- Fluorescência de campo amplo
- A microscopia de fluorescência é necessária para observar componentes celulares que apresentam fluorescência ou marcações fluorescentes.
- Integração de câmeras
- Nikon manufactures and distributes a variety of cameras well suited to tissue culture related tasks.